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做ELISA實(shí)驗(yàn),事先收集好的標(biāo)本需如何處理?
更新時間:2023-12-04瀏覽:980次

  做ELISA實(shí)驗(yàn),事先收集好的標(biāo)本需如何處理?


  做ELISA實(shí)驗(yàn),在處理樣本應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項(xiàng)。

  【標(biāo)本收集注意事項(xiàng)】

  1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。

  2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。

  3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

  4.標(biāo)本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融。

  5.可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù)) 。

  6.收集標(biāo)本,盡量做到雙份的用量,避免一次實(shí)驗(yàn)失敗,重復(fù)實(shí)驗(yàn)時標(biāo)本缺失,從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

  


  7.收集標(biāo)本時,應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套,口罩,護(hù)目鏡等),認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險性。

  8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。

  樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的:

  【標(biāo)本處理辦法】

  1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。

  注:樣品稀釋的一般原則

  用戶須查閱相關(guān)文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

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