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產(chǎn)品快訊:過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2023-11-13瀏覽:797次

  產(chǎn)品快訊:過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒


  規(guī)格:50T/48S

  注意:正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

  產(chǎn)品內(nèi)容:

  提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

  試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

  試劑二:液體 0.33mL×2 瓶,4℃保存;用時(shí)每瓶加入5mL 試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

  試劑三:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存。

  產(chǎn)品說(shuō)明:

  POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過(guò)氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過(guò)氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物, 在470nm有特征光吸收。

  需自備的儀器和用品:

  可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

  過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒操作步驟:

  一、粗酶液提?。?/p>

  1、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

  細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

  組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入

  1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

  2、 血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟:

  1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至470nm,蒸餾水調(diào)零。

  2、測(cè)定前將試劑一、二和三 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)放置10min。

  3、樣本測(cè)定表

  試劑名稱(µL)測(cè)定管

  樣本15

  蒸餾水270

  試劑一520

  試劑二130

  試劑三135

  在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄470nm下30s 時(shí)的吸光值

  A1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

  注意:

  a.若一次性測(cè)定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在 37℃(哺乳動(dòng)物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上,測(cè)定時(shí)加入15µL 樣本和1055µL 混合液測(cè)定。

  b.如果ΔA 小于0.005,可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果ΔA 大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

  三、POD 活性計(jì)算:

  1、 血清(漿)POD 活性

  單位定義:每mL血清(漿)在每mL 反應(yīng)體系中每分鐘A470 變化0.01 為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式:POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA

  2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞 POD 活性

  (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

  單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

  POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

  (2)按樣本鮮重計(jì)算

  單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

  POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

  (3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

  單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

  POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=14.27×ΔA

  V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07mL;V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。

  過(guò)氧化物酶試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。

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